Production de mycélium de champignons shiitake

La production de mycélium de shiitake comprend trois étapes : la culture du mycélium mère, la culture du mycélium primaire et la culture du mycélium secondaire. Le mycélium mère doit être une souche supérieure ayant subi des essais de fructification et ayant été identifiée ; il s’agit d’un mycélium cultivé en éprouvette, également appelé mycélium primaire. Le mycélium primaire est multiplié à partir du mycélium mère et inoculé dans de la sciure de bois ou un milieu de culture granulaire ; il est également appelé mycélium secondaire. Le mycélium secondaire est multiplié à partir du mycélium primaire par inoculation dans un milieu de culture à base de sciure de bois afin de répondre aux besoins de production à grande échelle ; il est également appelé mycélium tertiaire. Chaque producteur de mycélium doit prévoir son budget et planifier ses commandes à l’avance en fonction de son volume de production réel afin d’éviter tout retard dans le cycle de production.

Isolement de la progéniture
L'isolement du mycélium de shiitake peut se faire par extraction de tissus ou par extraction de spores. L'extraction de spores est généralement utilisée pour la sélection du mycélium, tandis que l'extraction de tissus est plus couramment employée en production. Les méthodes spécifiques d'extraction de tissus sont décrites ci-dessous.

(1) Préparation du matériel et du milieu de culture
Scalpel ou couteau de dissection, aiguille d'inoculation, lampe à alcool, coton, alcool à 75 % et milieu de dextrose de pomme de terre.

(2) Sélection des plants de champignons : Sélectionner les plants de champignons sur les bûches de substrat présentant une forte viabilité mycélienne, une fructification normale et une croissance vigoureuse. Choisir des carpophores frais, gros, ronds, à chair épaisse, à pied court et fin, de couleur foncée, à chapeau fermé, conformes aux caractéristiques variétales et matures en 6 à 7 parties.

(3) Désinfection des semencettes de champignons : retirer les débris de surface, couper la partie du milieu de culture à la base du pied et désinfecter la surface des semencettes avec un coton imbibé d’alcool à 75 %. Transférer ensuite le matériel de séparation et le milieu de culture dans la boîte d’inoculation et procéder à une désinfection de routine avant la séparation.

(4) Séparation des blocs de tissu : Après s’être désinfecté les mains, déchirer la tige en deux, de la base vers le haut. À l’aide d’un couteau bien aiguisé, couper le bloc de tissu légèrement au-dessus de la jonction entre la tige et le chapeau. Transférer ensuite le bloc de tissu coupé dans le milieu de culture incliné, légèrement en retrait du centre, à l’aide d’une aiguille d’inoculation ou d’une pince. (5) Culture : Placer les tubes à essai contenant les blocs de tissu inoculés à une température constante de 25 à 27 °C. Généralement, après 48 heures, les blocs de tissu commencent à se rétablir : un mycélium gris-blanc se développe autour d’eux et colonise le milieu de culture. Lorsque le mycélium atteint environ 1 à 2 cm de hauteur, sélectionner les tubes à essai présentant un mycélium vigoureux, le découper en petits morceaux à l’aide d’un outil d’inoculation et les transférer dans un nouveau milieu de culture incliné. Après culture, ces fragments constituent la culture mère.

(6) Inspection : Le contrôle qualité de la culture mère est essentiel. La culture mère obtenue par isolement tissulaire est constituée de mycélium binucléé. Au microscope, chaque cellule du mycélium possède deux noyaux et des boucles d’anastomose sont présentes au niveau des septa cellulaires. Plus le nombre de boucles d’anastomose est élevé, plus la capacité de fructification est importante.

(7) Test de fructification : La culture mère obtenue par isolement de tissu doit passer un test de fructification pour confirmer sa normalité avant de pouvoir être utilisée à grande échelle.