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La production de mycélium commence généralement environ 80 jours avant l'inoculation des poches de fructification. Chaque souche mère permet de multiplier 5 flacons de mycélium, avec une durée de culture d'environ 30 jours. Le processus de production du mycélium est le suivant : préparation des ingrédients → mise en flacons et stérilisation → refroidissement et inoculation → culture.
(1) Formules principales des milieux de culture
① Milieu de culture à base de sciure de bois : sciure de bois à feuilles larges 7-8 %, son de blé 2-0 %, sucre 1 %, gypse 1 %, pH 6,5-7.
② Milieu de culture à base de coques de graines de coton : coques de graines de coton 7-8 %, son de blé 2-0 %, sucre 1 %, gypse 1 %, pH 6,5-7.
(2) Sélection des flacons de mycélium : les flacons de mycélium standard de 500 ml sont couramment utilisés.
(3) Mélange, ébullition (ensachage), stérilisation et refroidissement
① Mélange : Mélanger uniformément le matériel et l’eau selon les méthodes habituelles. ② Mise en bouteille : Après avoir lavé et séché les flacons de culture, les remplir de milieu de culture jusqu’à l’épaule. Essuyer l’intérieur et l’extérieur des flacons et les fermer avec un bouchon percé de trous d’aération.
③ Stérilisation et refroidissement : Le contrôle de la température est crucial lors de la stérilisation. Des cuves de stérilisation haute pression doivent être utilisées pour la stérilisation centralisée du milieu de culture. Le maintien d’une pression de vapeur de 0,15 MPa pendant 2 heures permet une stérilisation complète. Lors du refroidissement des flacons de culture stérilisés, il convient de purger lentement le gaz afin d’abaisser la température. Une fois que la température à l’intérieur de la cuve de stérilisation atteint 60 °C, les transférer dans une chambre froide pour un refroidissement complet.
(4) Inoculation : Inoculer dans une boîte ou une salle d’inoculation. Étapes de l’inoculation : Placer les flacons de culture refroidis dans la boîte en respectant sa capacité, en laissant suffisamment d’espace pour le transfert des flacons. Préparer la boîte (ou la salle) avec les tubes de culture mère et le matériel d’inoculation nécessaire pour une désinfection préalable. Après avoir activé le désinfectant à brouillard gazeux, sceller et désinfecter immédiatement la boîte (ou la salle). Lors de l’inoculation, dans des conditions aseptiques, découper le milieu de culture incliné de la culture mère en 5 morceaux. Le premier morceau doit être plus long car le milieu de culture est fluide et sèche facilement, ce qui nuit à la croissance mycélienne. Transférer ensuite ce morceau avec le milieu de culture dans le flacon de culture d’origine, en inoculant un morceau par flacon et en veillant à ce qu’il soit proche de l’orifice d’inoculation pour faciliter la germination du fragment de culture mère. Après la germination, planter le fragment de culture mère dès que possible.
(5) Culture. La salle de culture initiale doit être propre, sèche et fraîche. La température intérieure doit être maintenue entre 23 et 25 °C, l'humidité relative entre 40 et 50 %, et l'air intérieur doit être renouvelé. Les fenêtres de la salle de culture initiale doivent être recouvertes d'un tissu noir afin de protéger le mycélium de la lumière, qui provoque l'évaporation de l'humidité du substrat et, par conséquent, l'apparition prématurée et le vieillissement des primordia. Pendant la culture initiale, les flacons de culture doivent être régulièrement contrôlés afin de détecter toute contamination bactérienne. En cas de contamination, les flacons doivent être immédiatement jetés. La culture initiale atteint généralement sa pleine maturité en 30 jours.
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